Wڪنسنٽريشن wٻرندڙ مائع:استعمال ڪرڻ کان اڳ، ڌوئڻ جي حل کي ڪمري جي حرارت (20-25 درجا) تي بحال ڪيو وڃي ۽ ان کي يونيفارم ڪرڻ لاء هڪجهڙائي سان ڇڪيو وڃي. ان کان پوءِ 20 ڀيرا ڪنسنٽريڊ واشنگ سلوشن کي صاف ٿيل پاڻي سان ملايو (مثال طور، 5ml ڪنسنٽريڊ واشنگ سلوشن 95ml پيوريفائيڊ واٽر ۾ شامل ڪيو ويندو آهي)، چڱيءَ طرح ملايو، ۽ ملائي ٿيل واشنگ مائع کي 2-8 درجا تي 7 ڏينهن تائين ذخيرو ڪري سگهجي ٿو.
1.2 نموني تيار ڪرڻ
① سڄي جانور جو رت ورتو ويو، 4000rpm تي 10 منٽن لاء سينٽرفيوج ڪيو ويو، ۽ سپرنيٽنٽ گڏ ڪيو ويو. سيرم کي هيمولائيزيشن کان سواءِ قدرتي طور تي گڏ ڪري سگهجي ٿو.
② 50 ڀيرا ٽيسٽ ڪرڻ لاءِ سيرم کي ڊيليوٽ ڪريو سيرم ڊيليوشن پليٽ ۾ (مثال طور: 147ul نموني ڊيليوئنٽ ۾ ٽيسٽ ڪرڻ لاءِ سيرم جو 3ul شامل ڪريو).
نوٽ: ناڪاري ۽ هاڪاري ڪنٽرول کي گھٽائڻ جي ضرورت ناهي
1.3 ٽيسٽ جو طريقو
① انزائيم ليبل مائيڪرو پليٽ وٺو (نمونن جي تعداد جي مطابق، جدا ڪري سگھجي ٿو ۽ ڪيترائي ڀيرا استعمال ڪري سگھجي ٿو)، انزائم ليبل مائيڪرو پليٽ ۾ 100ul ملائي سيرم شامل ڪريو، منفي ڪنٽرول ۽ مثبت ڪنٽرول لاءِ ھر ھڪ کي ٻه کوھ مقرر ڪريو، ۽ رد عمل ۾ چڱيءَ طرح 100ul شامل ڪريو. نموني کي کوھ ۾ ھلايو، سيلنگ پليٽ فلم استعمال ڪندي پليٽ کي ڍڪيو، ۽ 37 درجا تي 30 منٽن تائين سينگ ڪريو.
②سيلنگ پليٽ فلم کي کوليو، پليٽ ۾ موجود محلول کي چڱيءَ طرح ڌوئي ڇڏيو، 300µl ڪم ڪندڙ ڪنسنٽريشن واشنگ مائع کي هر کوهه ۾ شامل ڪريو، ۽ پوءِ ان مائع کي کوهه ۾ ڇڏي ڏيو. مٿي ڏنل قدمن کي 5 ڀيرا ورجايو، ۽ آخر ۾ صاف جاذب ڪاغذ تي سڪي ڇڏيو.
③Diluted enzyme conjugate: Enzyme conjugate (80×) کي 80 ڀيرا گھٽايو (مثال طور: 10ul enzyme conjugate concentrate + 790ul sample diluent، مخصوص مقدار جي گھربل جانچ جي نمونن جي تعداد جي حساب سان حساب ڪئي ويندي آھي)، چڱيءَ طرح ملايو ۽ الڳ ڪري ڇڏيو.
④ هر کوهه ۾ 100µl Enzyme Conjugate شامل ڪريو، پليٽ کي ڍڪيو، ۽ 37 درجا تي 30 منٽن تائين سينگيو.
⑥هر کوهه ۾ 100µl سبسٽريٽ جو حل شامل ڪريو، پليٽ کي ڍڪيو ۽ 10 منٽن لاءِ روشنيءَ کان 37 درجا پري رکي.
قدم 2 نتيجن جي تشريح
هر کوهه جو OD450 قدر 96-well microplate reader تي پڙهيو ويو.
2.1 تصديق منفي ڪنٽرول جي اوسط OD450nm قدر <0.25 هئي ۽ مثبت ڪنٽرول جي اوسط OD450nm قدر 0.6 کان وڌيڪ يا برابر هئي، تجرباتي نتيجا صحيح هئا. ٻي صورت ۾، امتحان بار بار ٿيڻ گهرجي.
2.2 حساب ڪتاب جو طريقو
هر نموني لاءِ، S/P جو حساب ڪريو جيئن صحيح نموني ۽ ڪنٽرول ويلز استعمال ڪندي:
2.3 نتيجن جي تشريح
جڏهن S/P <0.2، اهو منفي طور تي فيصلو ڪيو ويندو آهي.
جڏهن S/P > 0.3، ان کي مثبت سمجهيو ويندو آهي.
جڏهن 0.2 S/P کان گهٽ يا برابر 0.3 کان گهٽ يا برابر، ان کي مشڪوڪ قرار ڏنو وڃي ٿو، ۽ تجويز ڪيو وڃي ٿو ته نموني ٻيهر ورجائي ۽ هڪ هفتي بعد ٽيسٽ ڪريو.
