تفصيل
تفصيل
PCV-Ⅱ Ab Elisa
ارادو استعمال:
Porcine Circovirus Type-Ⅱ Antibody ELISA Detection Kit آهي مخصوص PCV اينٽي باڊي جو تعين ڪرڻ لاءِ سور جي سيرم ۾ ويٽرو. ٽيسٽ کي استعمال ڪيو ويندو آهي ويڪسينائيزيشن مان اميونائيزيشن کان وٺي سور فارمن جي سورن جي سرڪووائرس قسم-Ⅱ ويڪسين سان.
نموني:سيرم
مهيا ڪيل مواد:
امتحان جا طريقا ۽ تشريح
قدم 1 ٽيسٽ جو طريقو
1.1 ڌوئڻ جو حل تيار ڪرڻ
ڪم ڪنسنٽريشن واشنگ مائع: استعمال ڪرڻ کان اڳ، ڌوئڻ جي حل کي ڪمري جي حرارت (20-25 درجا) تي بحال ڪيو وڃي ۽ ان کي هڪجهڙائي ڪرڻ لاء هڪجهڙائي سان ڇڪيو وڃي. ان کان پوءِ 20 ڀيرا ڪنسنٽريڊ واشنگ سلوشن کي صاف ٿيل پاڻي سان ملايو (مثال طور، 5ml ڪنسنٽريڊ واشنگ سلوشن 95ml پيوريفائيڊ واٽر ۾ شامل ڪيو ويندو آهي)، چڱيءَ طرح ملايو، ۽ ملائي ٿيل واشنگ مائع کي 2-8 درجا تي 7 ڏينهن تائين ذخيرو ڪري سگهجي ٿو.
1.2 نموني تيار ڪرڻ
① سڄي جانور جو رت ورتو ويو، 4000rpm تي 10 منٽن لاء سينٽرفيوج ڪيو ويو، ۽ سپرنيٽنٽ گڏ ڪيو ويو. سيرم کي هيمولائيزيشن کان سواءِ قدرتي طور تي گڏ ڪري سگهجي ٿو.
② سيرم جو نمونو 1:25 کي ملايو (5ul سيرم جو نمونو 120ul سيرم ڊيلوئنٽ ۾ شامل ڪريو) ۽ چڱي طرح ملايو.
نوٽ: ناڪاري ۽ هاڪاري ڪنٽرول کي گھٽائڻ جي ضرورت ناهي.
1.3 Enzyme conjugate تياري
انزائيم ڪنجوگيٽ 1:25 کي ملايو (5ul اينزائم ڪنجوگيٽ کي 120ul اينزائم ڊيلوئنٽ ۾ شامل ڪريو) ۽ چڱي طرح ملايو.
1.4 ٽيسٽ جو طريقو
① انزائيم ليبل مائيڪرو پليٽ وٺو (نمونن جي تعداد جي مطابق، جدا ڪري سگھجي ٿو ۽ ڪيترائي ڀيرا استعمال ڪري سگھجي ٿو)، انزائم ليبل مائيڪرو پليٽ ۾ 100ul ملائي سيرم شامل ڪريو، منفي ۽ مثبت نمونن لاءِ ٻه کوھ مقرر ڪريو، ۽ رد عمل جي منفي ۽ مثبت ڪنٽرول لاءِ 100ul شامل ڪريو. نموني کي کوھ ۾ ھلايو، سيلنگ پليٽ فلم استعمال ڪندي پليٽ کي ڍڪيو، ۽ 37 درجا تي 30 منٽن تائين سينگ ڪريو.
②سيلنگ پليٽ فلم کي کوليو، پليٽ ۾ موجود محلول کي چڱيءَ طرح ڌوئي ڇڏيو، 300µl ڪم ڪندڙ ڪنسنٽريشن واشنگ مائع کي هر کوهه ۾ شامل ڪريو، ۽ پوءِ ان مائع کي کوهه ۾ ڇڏي ڏيو. مٿي ڏنل قدمن کي 5 ڀيرا ورجايو، ۽ آخر ۾ صاف جاذب ڪاغذ تي سڪي ڇڏيو.
③هر کوهه ۾ 100µl Enzyme Conjugate شامل ڪريو، پليٽ کي ڍڪيو، ۽ 37 درجا تي 45 منٽن تائين سينگيو.
④ سيلنگ پليٽ فلم کي کوليو، پليٽ ۾ موجود محلول کي چڱيءَ طرح ڇڪيو، هر کوهه ۾ 300µl ڪم ڪندڙ ڪنسنٽريشن واشنگ مائع شامل ڪريو، ۽ پوءِ ان مائع کي کوهه ۾ ڇڏي ڏيو. مٿي ڏنل قدمن کي 5 ڀيرا ورجايو، ۽ آخر ۾ صاف جاذب ڪاغذ تي سڪي ڇڏيو.
⑤هر کوهه ۾ 100µl سبسٽريٽ حل شامل ڪريو، پليٽ کي ڍڪيو ۽ 10 منٽن تائين روشني کان 37 درجا پري رکي.
⑥هر کوهه ۾ 50µl اسٽاپ حل شامل ڪريو، ۽ 5 منٽن اندر نتيجو طئي ڪريو.
قدم 2 نتيجن جي تشريح
هر کوهه جو OD450 قدر 96-well microplate reader تي پڙهيو ويو.
2.1 تصديق
منفي ڪنٽرول جي اوسط OD450nm قدر هئي<0.1 and the average OD450nm value of positive control /the average OD450nm value of negative control was ≥5, the experimental results were valid. Otherwise, the test should be repeated.
2.2 حساب ڪتاب جو طريقو
هر نموني لاءِ، S/P جو حساب ڪريو جيئن صحيح نموني ۽ ڪنٽرول ويلز استعمال ڪندي:
S / P= (ODنمونو-ODاين سي) / (ODپي سي-ODاين سي)
2.3 نتيجن جي تشريح
جڏهن S/P<0.15, it is judged as negative.
جڏهن S/P 0.25 کان وڌيڪ يا برابر آهي، ان کي مثبت سمجهيو ويندو آهي.
جڏهن 0.15 S/P کان گهٽ يا برابر<0.25, it is judged as suspicious, and suggest to repeat sampling and test one week later.
گرم ٽيگ: پورسائن سرڪووائرس جو قسم
پويون: ڪوبه ڄاڻ ناهي
